磷脂酶 C（ Phospholipases C，PLC ）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

磷脂酶 C試劑盒 脂肪酸系列

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

磷脂酶C（EC3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯C3 位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶，廣泛存在于微生物及動植物的組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。

測定原理：

磷脂酶C 催化水解NPPC 產(chǎn)生對硝基苯fen，在 410nm 處有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

酶液提取:

組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1ml 試劑一。

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后于 4℃，10000g離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1ml 試劑一。

血清：直接測定。

測定操作:

酶活計(jì)算公式:

用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下 標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷V 樣÷T

= 17.45×（△A+0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min

用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0095x - 0.0103，R2 = 0.9991

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

= 35.09×（△A+0.0103）÷ W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T

=35.09×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯fen所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總÷V 樣÷T

= 35.09×（△A+0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min

磷脂酶 C試劑盒 脂肪酸系列