土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性試劑盒說明書

微量法 100T/96S

土壤脂肪酶活性試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于各種生物中。

測定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算 LPS 活性。

試劑組成和配制：

試劑二：液體 10ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩 20min。

標準品：液體 10 μl×1 瓶，10 µmol/ml 的標準溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯 80ml、冰和蒸餾水。

樣本處理：

建議稱取約 0.1g 土樣，加入 1ml 試劑一進行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取 15min，4℃，4000g離心 10min，取上清待測。

S-LPS 測定操作：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一和試劑二置于 37℃水浴預熱 30min。

3、在 1.5ml EP 管中依次加入下列試劑；

37℃振蕩反應 10 min。

37℃振蕩反應 10 min 后，8000g，25℃，離心 10min，取上清液

37℃振蕩反應 5 min 后，靜置 5min，取 200μl 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 處測定吸光值。

注意事項:

空白管和標準管只需測定一次。

S-LPS 活性計算公式：

活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V樣÷V 樣總）÷T=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]÷W

C 標準品：10 µmol/ml；V 反總：反應總體積，0.8ml；V 樣：反應中加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml； W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應時間，10 min。

土壤脂肪酶活性試劑盒