土壤外切-β-1，4-葡聚糖酶/纖維二糖苷酶（S-C1）活性測定試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

土壤外切葡聚糖酶/纖維二糖苷酶活性試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

C1（EC3.2.1.91）存在于細菌、真菌和動物體內，是纖維素酶系的組份之一，C1 催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測定原理：

采用 3,5－二硝基水楊酸法測定S-C1 催化微晶纖維素降解產生的還原糖的含量。

試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、離心機、可調式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測定的準備：

稱取約 0.1g 新鮮土樣或風干土樣，加入 1ml 提取液，進行冰浴勻漿，室溫振蕩提取 30min，然后 10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調零。

2、加樣表（在EP 管中依次加入下列試劑）

混勻，37℃準確水浴 2h

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，測 540nm 下吸光值A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。

S-C1 活性計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為 y = 6.4078x - 0.0673；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每g 土樣每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應體系總體積，0.11ml； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，120 min； W：樣本質量，g；

用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為 y = 3.2039x - 0.0673；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每g 組織每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應體系總體積，0.11ml； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，120 min； W：樣本質量，g。

土壤外切葡聚糖酶/纖維二糖苷酶活性試劑盒