β-木糖苷酶（β- xylosidase）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/48 樣

β-木糖苷酶測(cè)定試劑盒 糖代謝

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：

β-木糖苷酶催化對(duì)硝基苯fen-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基苯fen，對(duì)硝基苯fen在 405nm 處有特征吸收峰，測(cè)定405nm 光吸收增加速率，可計(jì)算β-木糖苷酶活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清待測(cè)。

細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm。

2、操作表

β-木糖苷酶活性計(jì)算公式：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。

1、按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每毫克蛋白 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T×1000

= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每 104 個(gè)細(xì)胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

（4）按液體體積計(jì)算

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每毫升液體 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷V 樣÷T×1000

=11.34×(ΔA-0.0011)

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.12ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA

1、按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每毫克蛋白 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T×1000

= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每 104 個(gè)細(xì)胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

（4）按液體體積計(jì)算

酶活定義：45℃，pH7.4 時(shí)每毫升液體 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基苯fen為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷V 樣÷T×1000

=22.68×(ΔA-0.0011)

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.12ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；1000:1μmol/ml=1000nmol/ml

ΔA 控制在 0.01-1 范圍內(nèi)，若ΔA 大于 1，可適當(dāng)減小樣本量。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。

β-木糖苷酶測(cè)定試劑盒 糖代謝