查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)試劑盒說明書

微量法 100T/96S

查爾酮異構(gòu)酶試劑盒 抗氧

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的黃酮類化合物合成相關(guān)酶，也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。

測(cè)定原理：

查爾酮異構(gòu)酶（CHI）催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮，通過測(cè)定 381nm 下的吸光度變化表示CHI 的活性。

組成：

試劑三：臨用前加 2ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 381nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定表

在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10µl 上清液和 190µl 試劑二，立即混勻并記錄 381nm 下初始吸光值

A1 和 37℃保溫 30min 后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。

CHI 活性計(jì)算：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)A381 變化 0.1 為一個(gè)酶活力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí) A381 變化 0.1 為一個(gè)酶活力單位。

CHI（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =400×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量。

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)A381 變化 0.05 為一個(gè)酶活力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.05÷T =800×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí) A381 變化 0.05 為一個(gè)酶活力單位。

CHI（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.05÷T =800×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量。

查爾酮異構(gòu)酶試劑盒 抗氧