諾博萊德 Fast HiFi PCR Master Mix（含染料）

2× FastHiFi PCR Master Mix (含染料)

目錄號(hào):71812

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年。

經(jīng)常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2× FastHiFi PCR Mix為多種采用最xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴(kuò)增長(zhǎng)度、擴(kuò)增速度、保真性和產(chǎn)量。2× FastHiFi PCR Mix是長(zhǎng)片段、超保真、快速擴(kuò)增的shou選產(chǎn)品。

PCR產(chǎn)物為平末端，不需要加A頭，可直接用平末端系列載體（Cat#V116、V117）克隆。

本產(chǎn)品包含F(xiàn)astHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。使用時(shí)，只需加入模板、引物，并補(bǔ)足水至Mix終濃度為1×即可。

本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測(cè)序等后續(xù)操作。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高產(chǎn)：一般 PCR 產(chǎn)物量比傳統(tǒng)產(chǎn)量高 50%-100%！

2. 高效：延伸速度可以達(dá)到 3-4kb/min，是 pfu 的 6-8 倍！

3. 高成功率：對(duì)于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果！

4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍!

5. 擴(kuò)增長(zhǎng)度長(zhǎng)：以復(fù)雜基因組 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 3kb，以簡(jiǎn)單基因組、質(zhì)粒和噬菌體 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 6kb。

2   × FastHiFi PCR Master Mix 使用說明：

一、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)

參考模板用量：（以 50 μl 反應(yīng)體系為例）

質(zhì)粒：0.1-10 ng；

細(xì)菌基因組：10-100 ng；

人類基因組：50-150 ng；

cDNA：1-5 μl from RT。

注意：實(shí)際操作中，首先要計(jì)算好需要補(bǔ)加 ddH2O 的量以后，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分，最后加 FastHiFi PCR Mix，瞬離，上機(jī)。

二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件：（請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整）

注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C

1. 質(zhì)粒和簡(jiǎn)單基因組等簡(jiǎn)單模板，可以采用 10-15 sec/kb；復(fù)雜模板 ( 如人類 基因組 DNA )，可以采用 20-25 sec/kb。

2. 對(duì)于高 GC 含量的模板，預(yù)變性和變性溫度可以提高到 98℃。

3. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象，或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象，一般提示延伸時(shí)間過長(zhǎng)，梯度縮短延伸時(shí)間（建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時(shí)間）直到獲得滿意結(jié)果。

三、結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

Fast HiFi PCR Master Mix（含染料）