一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

一氧化氮含量測(cè)定試劑盒 信號(hào)系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過(guò)程中起著重要的作用。

測(cè)定原理：

NO 在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO₂—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在 550nm 處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算 NO 含量。

組成：

試劑二：液體 15ml×1 瓶，4℃避光保存。（用之前 60℃加熱震蕩 15min）

自備儀器和用品：

天平、研缽或勻漿器、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水。

樣品處理：

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測(cè)。

細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 15min，取上清置于冰上待測(cè)。

體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟和操作表：

NO 含量計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R²= 0. 9986 1、組織樣品：

按樣本質(zhì)量計(jì)算

NO 含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×10^-3

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷W

按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO 含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣×Cpr）×10^-3

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細(xì)胞：

NO 含量（μmol/10⁴ cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10^-3

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3、其他樣品：

NO 含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷V 樣

= 140×（ΔA +0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.9ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.4ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml

一氧化氮含量測(cè)定試劑盒 信號(hào)系列