維生素E（Vitamin E，VE）試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/24 樣

維生素E試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

維生素E（Vitamin E）是一種脂溶xing維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中最主要的抗氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過(guò)氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：

VE 還原Fe³⁺為Fe²⁺，F(xiàn)e²⁺與 1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在 530nm 有特征吸收峰。

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，-20 ℃保存，用時(shí)加入 4ml 蒸餾水，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周；試劑四：粉劑×1 瓶，4 ℃保存，用時(shí)加入 4ml 蒸餾水，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周；自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、漩渦震蕩儀。

樣本處理：

組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g，加入 1ml 提取液）加入提取液，充分勻漿后用提取液定至 2ml，在漩渦混勻儀上震蕩 5min，于 25℃，5000g 離心 10min，取上層測(cè)定。

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 1000 萬(wàn)細(xì)胞加入 2ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；在漩渦混勻儀上震蕩 5min，于 25℃，5000g 離心 10min，取上層測(cè)定。

血清：取 0.1ml，加 1.9ml 提取液，漩渦儀混勻上震蕩 5min，于 25℃，5000g 離心 10min，取上層測(cè)定。

測(cè)定操作：

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.22x + 0.0065， R² = 0.9978

按照蛋白含量計(jì)算

VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷（V 樣×Cpr）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VE 含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VE 含量（μg/10⁴ cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

VE 含量（μg/ml）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷V 樣×20

= 181.82×（△A -0.0065）

V 反總：反應(yīng)總體積，1ml；：V 樣：加入樣本體積，0.5ml；V 樣總：加入提取液體積，2ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

最di檢出限為 1μg/g。

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