乙醇酸氧化酶（glycollic oxidase, GO）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管 48 樣

乙醇酸氧化酶試劑盒 光合系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶，也是光下合成草酸的關(guān)鍵酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，對(duì)研究光呼吸代謝過(guò)程及其調(diào)控具有重要意義。

測(cè)定原理：

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙，在 324nm 有特征吸收峰。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 10ml 雙蒸水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml 石英比色皿。

酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g， 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

酶活性計(jì)算公式

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化 1 nmol 乙醇酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO 活性（nmol/min /mg prot）= 2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算

?A

?? d

×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 392×△A÷Cpr 

酶活性定義：每克組織每分鐘氧化 1 nmol 乙醇酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。 

GO 活性（nmol/min /g 鮮重

?A

?? d

×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T= 392×△A÷W

ε：乙醛酸苯腙毫摩爾消光系數(shù)：17L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，1ml；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量， g；T：反應(yīng)時(shí)間，3min

注意事項(xiàng)：

測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

色素含量較高的樣品，可在提取酶時(shí)加活性炭吸附。

乙醇酸氧化酶試劑盒 光合系列