尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/96 樣

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶試劑盒 糖原

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將 1-磷酸葡萄糖與UTP 分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG）。

測(cè)定原理：

UGP 可逆催化反應(yīng)生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將 NADP轉(zhuǎn)化為NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了UGP 活性。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 2ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 2ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 2ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板

酶液提取：

組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 4℃，10000g離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μl 試劑一，20μl 試劑二，20μl 試劑三，20μl 試劑四，20μl試劑五，20μl 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 30s 的吸光值A(chǔ)1 和 330s 的吸光值A(chǔ)2，△A=A2-A1

計(jì)算公式：

使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活單位定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總) ÷T

=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=321.54×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活單位定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總) ÷T

=643.08×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /ml）=ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=643.08×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶試劑盒 糖原