乳酸含量（lactic acid，LA）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

乳酸含量試劑盒 三羧酸

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理：

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙tong酸，同時使 NAD⁺還原生成NADH 和H⁺，H⁺傳遞給PMS 生成的PMSH2 還原INT 生成紅色物質(zhì)，在 530nm 處有特征吸收峰。

組成：

試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加入 0.6ml 蒸餾水充分溶解。試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 6ml 蒸餾水充分溶解。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有4 個棕色空瓶）

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

樣本處理：

組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，12000g 離心 10min，取上清測定。

細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；于 4℃，12000g離心 10min，取上清測定。

血清：直接測定。

測定操作：

注意：標準對照管和標準測定管只需測定一次，每個樣品測定管設(shè)一個樣品對照管

計算公式：

按照蛋白含量計算

LA 含量（μmol/mg prot）= △A 樣÷△A 標×C 標÷ Cpr

= 2×△A 樣÷△A 標÷ Cpr

按照樣本質(zhì)量計算

LA 含量（μmol/g 鮮重）= △A 樣÷△A 標×C 標÷ W

= 2×△A 樣÷△A 標÷ W

按照細胞數(shù)量計算

LA 含量（μmol/10⁴ cell）= △A 樣÷△A 標×C 標÷ 細胞數(shù)量

= 2×△A 樣÷△A 標÷ 細胞數(shù)量

按照液體體積計算

LA 含量（μmol/ml）= △A 樣÷△A 標×C 標

= 2×△A 樣÷△A 標

C 標：標準品濃度，2mmol/L；W：樣本質(zhì)量，g/ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml

注意事項：

若吸光值超過 2，請進行適當?shù)南♂尯笤龠M行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

最di檢出限為 1.8μmol/L。

乳酸含量試劑盒 三羧酸