堿性木聚糖酶（Basic Xylanase，BAX）測定試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

堿性木聚糖酶測定試劑盒 糖代謝

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)堿的原料細胞壁以及β+葡聚糖，降低釀造堿物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料堿的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)堿，BAX 一般分離自最適生長pH 為 9 +11 的微生物。

測定原理：

BAX 在堿性環(huán)境堿催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與 3,5+二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在 540nm 處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在 540nm 吸光值增加速率，可計算BAX 活力。

組成：

試劑一：液體 10ml×1 瓶，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可 60℃加熱溶解后使用）。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

粗酶提?。?/span>

發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000g，4℃，離心 15min，取上清，作為待測樣品。

酶干粉：稱約 0.1mg，加 1ml 緩沖液溶解待測。

組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml緩沖液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清待測。

測定操作表：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長至 540nm。

2、操作表

BAX 計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 2.8432x - 0.0293，R2 = 0.9985

按液體體積活力計算：

酶活定義：50℃，pH9.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA+0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 391× (ΔA+0.0293)

按蛋白濃度計算：

酶活定義：50℃，pH9.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

按鮮重計算：

酶活定義：50℃，pH9.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；

106：轉化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。

用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 1.4216x - 0.0293，R2 = 0.9985

按液體體積活力計算：

酶活定義：50℃，pH9.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA+0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 782× (ΔA+0.0293)

按蛋白濃度計算：

酶活定義：50℃，pH9.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

按鮮重計算：

酶活定義：50℃，pH9.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA +0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；

106：轉化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。

注意事項：

吸光度變化應該控制在 0.01～0.8 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變；也可以延長或者縮短反應時間。

試劑盒 2+8℃保存，保質期 3 個月，建議盡快使用。

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