山li醇脫氫酶（sorbitol dehydrogenase，SH）試劑盒說明書

微量法100 管/96 樣

山li醇脫氫酶試劑盒 糖代謝

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

SH（EC 1.1.1.14）催化山li醇脫氫生成果糖，是調控生物體內山li醇含量的關健酶之一。

測定原理：

SH 催化山li醇脫氫生成果糖，同時還原 NAD⁺生成NADH，測定 340nm 吸光度增加速率可以計算 SH活性。

組成：

自備儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定

在試劑二中加入 7.6ml 試劑一和 11.4ml 蒸餾水充分溶解，置于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min；用不完的試劑 4℃保存一周；

在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 樣本和 190μl 試劑二，混勻，立即記錄 340nm 處 20s 時的吸光值A1 和 2min20s 后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

SH 活性計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）SH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=1608×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 SDH 活力的計算:

按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=1608×ΔA÷W

按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /10⁴ cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=3.216×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）SH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /ml）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=3216×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 SH 活力的計算:

按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=3216×ΔA÷W

按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min /10⁴ cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=6.426×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

山li醇脫氫酶試劑盒 糖代謝