NobleRyder G9268 堿性磷酸酶染色試劑盒(偶氮偶聯(lián)法)Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

產(chǎn)品貨號：G9268

產(chǎn)品名稱：堿性磷酸酶染色試劑盒(偶氮偶聯(lián)法)，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

產(chǎn)品規(guī)格：4*2ml/4*10ml/4*20ml

堿性磷酸酶染色試劑盒偶氮偶聯(lián)法

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：堿性磷酸酶染色試劑盒(偶氮偶聯(lián)法)

英文名稱：Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

規(guī)格：4*2ml ; 4*10ml ; 4*20ml

儲存條件：-20℃，避光保存，有效期6個月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

堿性磷酸酶染色試劑盒(偶氮偶聯(lián)法)，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)產(chǎn)品介紹

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。

堿性磷酸酶染色試劑盒(偶氮偶聯(lián)法)采用偶氮偶聯(lián)法來顯示堿性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內(nèi)堿性磷酸酶可使底物水解，原位釋放萘fen與呈色偶氮染料生成不溶有色產(chǎn)物，定位于細胞質(zhì)中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片等的堿性磷酸酶染色，活性部位呈藍色，位于胞漿 ，結(jié)果較金屬鹽沉淀法準確。

自備材料：

載玻片、濕盒、普通光學顯微鏡

操作步驟：(僅供參考) 試劑(C): 核固紅染色液可能會由于絮凝產(chǎn)生懸浮物或少量沉淀，建議取上清使用或沸水浴5-10min后晾至30-40℃使用。（見注意事項3）

(一) 樣本處理：

1、 細胞涂片：取新鮮全血或骨髓制備涂片，推玻片于載玻片保持30度，置于血液或細胞滴液的正前方，稍往后移與血液或細胞滴液接觸使后者沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動至均勻鋪開為止，自然晾干。

2、 貼壁培養(yǎng)細胞、細胞爬片：吸去培養(yǎng)基，1×PBS清洗3-4次，瀝去多余水分。取出細胞爬片。

3、 冰凍切片：從冰箱取出放置恢復(fù)室溫，浸入蒸餾水清洗1-2min，瀝去多余水分。

(二) 染色孵育：

1、使用2-8℃預(yù)冷的ALP固定液固定30s-3min，多數(shù)情況下30-60s即可。（見注意事項2）

2、蒸餾水洗，瀝去多余水分(不宜過分干燥)。

3、（切片處理）滴加ALP孵育液覆蓋切片，置于濕盒內(nèi)37℃溫箱孵育15-20min，蒸餾水洗。

4、 （貼壁細胞）滴加 ALP孵育液覆蓋細胞，置于37℃溫箱孵育15-20min，蒸餾水洗。

5、復(fù)染：核固紅或甲基綠復(fù)染液染色3-5min，對于冰凍切片，一般染色1-2min即可。

(三) 封片觀察：

1、（切片處理）蒸餾水稍洗，瀝去多余水分，滴加水性封片劑封片后鏡檢觀察。

2、（貼壁細胞）蒸餾水稍洗，可帶水或1×PBS鏡下觀察。

注意事項：

1. 血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。

2. 對于培養(yǎng)細胞和細胞爬片，如果固定后有細胞漂浮現(xiàn)象，可以使用4%多聚甲醛代替ALP固定液進行固定處理，室溫固定10-15min。

3. 試劑(C): 核固紅染色液為膠體性質(zhì)溶液，低溫（低于25℃）保存或長期儲存由于絮凝產(chǎn)生懸浮物或少量沉淀，屬于正常現(xiàn)象，一般不影響使用。如移液器吸取觀察到明顯渾濁，可擰緊瓶蓋沸水浴5-10min重新制備分散均勻的膠體溶液來恢復(fù)使用。

4. 培養(yǎng)細胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微，以免損傷或丟失細胞。

5. ALP 孵育液易失效或降低陽性強度，即配即用，不宜久置。

6. 復(fù)染時，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。

7. 每次染色時，應(yīng)有陽性對照片。

堿性磷酸酶染色試劑盒偶氮偶聯(lián)法 

產(chǎn)品訂購信息：

NobleRyder G9268 堿性磷酸酶染色試劑盒(偶氮偶聯(lián)法)，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)  4*2ml/4*10ml/4*20ml