NobleRyder BC8223  二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測試劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC8223

產(chǎn)品名稱：二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測試劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T/96S

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性試劑盒光合

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測試劑盒

英文名稱：Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

規(guī)格：100T/96S

檢測方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲存條件：Store at -20℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC8223二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測試劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

測定原理：

在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子的CO2結(jié)合，產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸，并使還原型輔酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的變化可計算還原型輔酶I氧化速率，還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。

需要的儀器，耗材：分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測定意義：

核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一個關(guān)鍵酶，既控制著CO2的固定，同時又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。

測定原理：

在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子的CO2結(jié)合，產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸，并使還原型輔酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的變化可計算還原型輔酶I氧化速率，還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。需要的儀器，耗材：分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品說明：

1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubisco,EC4.1.1.39)是植物光合作用中的一個關(guān)鍵酶，既控制著CO2的固定，同時又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。

在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結(jié)合，產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA)：PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸，伴隨著NADH氧化生成NAD*：在340nm NADH有特征吸收峰，而NAD+沒有此吸收峰，因此測定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、細(xì)菌或細(xì)胞樣本的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清：按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入lmL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次)：10000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。建議選取新鮮的植物樣本。

二、測定步驟

1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

三、Rubisco活性計算

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1.按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：25C中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmolNADH為一個酶活力單位。

Rubisco活力(U/mg prot) =[AAxV反總÷(εxd) x10°]+(CprxV樣) +T =344x△A+Cpr

2.按樣本質(zhì)量計算

單位的定義：25℃中每g組織每分鐘氧化1nmolNADH為一個酶活力單位。

Rubisco活力(U/g質(zhì)量)=[ΔAxV反總÷ (εxd) x10°]÷(V樣÷V樣總xW)+T=344xΔA+W

3.按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

單位的定義：25C中每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘氧化1nmolNADH為一個酶活力單位。

Rubisco活力(U/104cell) =[ΔAxV反總÷ (εxd) x10°]÷(V樣÷V樣總x500)÷T=0.69x△A

V反總：反應(yīng)體系總體積，2.14x10-L;ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22x103L/molcm;d：微量石英比色皿光徑，

1cm：V樣：加入樣本體積，0.02mL：V樣總：加入提取液體積，1mL;T：反應(yīng)時間，5min;W：樣本質(zhì)量，g;500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬;109：單位換算系數(shù)，Imol=10°nmol。

b.使用96孔UV板測定的計算公式如下：

將上述公式中光徑d-1cm改為d-0.6cm(96孔UV板光徑)進行計算。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性試劑盒光合 

產(chǎn)品訂購信息：

BC8223二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測試劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit 100T/96S