NobleRyder M0128 Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin

Strep-tag II 蛋白純化磁珠-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：M0128

產(chǎn)品名稱：Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin

產(chǎn)品規(guī)格：5mL

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder M0128 Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin是模擬鏈霉親和素-生wu素系統(tǒng)的新型蛋白純化系統(tǒng)，Strep-Tactin 對(duì) Strep-Tag II 的親和能力與鏈霉親和素相比，至少?gòu)?qiáng) 10 倍以上，且分離純化條件溫和，在生理?xiàng)l件下即可實(shí)現(xiàn)蛋白的分離純化；此外，與其他 tag 相比，Strep-TagII 為 8 個(gè)氨ji酸的小標(biāo)簽（WSHPQFEK），由于標(biāo)簽小，僅為1kDa左右，不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性， 并僅經(jīng)一步提取即可產(chǎn)出超過(guò) 99%的純度。

BeadsMagroseStrep-Tactin 磁珠采用特殊的蛋白偶聯(lián)工藝，將 Strep-Tactin 蛋白共價(jià)偶聯(lián)到超順磁性磁珠表面，制備了一種專為高效、快速分離純化Strep-tagII 蛋白的一種新型功能化材料，實(shí)現(xiàn)并搭建了提取速度、提取量及純度兼得的蛋白純化平臺(tái)。

適用范圍：

可用于從任何表達(dá)系統(tǒng)，包括桿狀病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌中含有 Strep-TagII 標(biāo)簽蛋白的分離純化。

操作步驟：

目標(biāo)蛋白與磁珠的結(jié)合性能將直接影響目標(biāo)蛋白的純化效率，各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標(biāo)蛋白的回收率和純度。以下提供一個(gè)較為廣泛應(yīng)用的Strep-TagII 蛋白的純化流程，用戶可參考該操作流程，或者根據(jù)自己蛋白的特性自行設(shè)計(jì)和優(yōu)化蛋白純化流程。

1、緩沖溶液配制

Binding/Washing Buffer ：10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH：8.0

Elution Buffer：2.5 mM desthiobiotin in Binding Buffer。

2、樣品處理

(1) 大腸桿菌、酵母等細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白：表達(dá)細(xì)胞用適量 BindingBuffer 稀釋，加入蛋白酶抑制劑（如終濃度為 1mM 的 PMSF）；冰浴超聲裂解細(xì)胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過(guò)于粘稠，可根據(jù)需要在粗樣品中加入適量核酸酶，在冰上放置 30min，以降解核酸。另外，如果目標(biāo)蛋白含量較低，建議將粗蛋白樣品進(jìn)行離心操作。

(2) 胞外表達(dá)蛋白：取胞外表達(dá)上清，用等量BindingBuffer 稀釋平衡，即為粗蛋白樣品。

(3) 動(dòng)物細(xì)胞胞內(nèi)表達(dá)蛋白：取適量動(dòng)物細(xì)胞，用適量 PBS 洗滌 1 次，棄上清；用適量含 1%（v/v） Triton X-100 或 1%（v/v）NP-40 的 Binding Buffer 重懸；加入蛋白酶抑制劑（如終濃度為 1mM 的PMSF）；置于冰上 10min，即為粗蛋白樣品。

3、磁珠預(yù)處理

一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據(jù)目標(biāo)蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息計(jì)算獲得。例如：采用大腸桿菌表達(dá)某目標(biāo)蛋白，250mL 發(fā)酵液收獲 1g 濕重的菌體，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)估算其目標(biāo)蛋白產(chǎn)量為~7mg，用戶需要取 10mL10%的磁珠懸液用于目標(biāo)蛋白的純化。以下即以此為例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明：

(1) 將磁珠產(chǎn)品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取 10mL 磁珠懸液于離心管中；

(2) 將離心管置于磁性分離器上，待溶液變澄清后，移去上清液；

(3) 加入 5~10mLBindingBuffer/Washing Buffer 到上述裝有磁珠的離心管中，蓋緊蓋子，漩渦振蕩15 s，使磁珠重新懸浮。將離心管置于磁性分離器上，磁性分離*，移去上清液，重復(fù)洗滌 2 次。

*注：在磁性分離過(guò)程中，為了減少磁珠在使用過(guò)程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。

4、目標(biāo)蛋白與磁珠結(jié)合

(1) 用 10mLBinding Buffer 重懸 1g 濕重的菌體，進(jìn)行破碎和裂解后，即為粗蛋白樣品；

(2) 將粗蛋白樣品轉(zhuǎn)移到裝有已預(yù)處理磁珠的離心管中，蓋緊離心管蓋；

(3) 將離心管置于漩渦混勻器振蕩 15s，然后將其置于垂直混合儀上，室溫垂直混勻 30min（如果需要，可在 2~8℃的低溫環(huán)境下旋轉(zhuǎn)混合約 1h，防止目標(biāo)蛋白降解）；

(4) 將離心管置于磁性分離器上進(jìn)行磁性分離，移出上清液到新的離心管中以備后續(xù)檢測(cè)。從磁性分離器上取下離心管進(jìn)行下一步洗滌步驟。

5、磁珠洗滌

(1) 將步驟 4 的磁珠中加入 5~10mLWashingBuffer，漩渦混合 2min，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測(cè)；

(2) 繼續(xù)將上述磁珠中加入 5~10mLWashingBuffer，漩渦混合 2min，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉(zhuǎn)移至新的離心管，避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標(biāo)蛋白；磁性分離，移出上清液到收集管，以備取樣檢測(cè)；

6、目標(biāo)蛋白洗脫

(1) 加入 2~5mLElution Buffer（用戶可根據(jù)需要改變洗脫體積調(diào)整目標(biāo)蛋白濃度）于離心管中，蓋緊離心管蓋，然后將離心管置于垂直混合儀上，室溫垂直混合洗脫 10min；磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標(biāo)蛋白樣品；

(2) 如果需要，可以重復(fù)上述步驟 1 次，收集樣品到新的離心管中，以檢測(cè)目標(biāo)蛋白是否洗脫wan全。

7、磁珠再生和保存

(1) NaOH 再生：洗脫目的蛋白后的磁珠按照以下順序進(jìn)行洗滌： 5~10mL 純化水洗滌 3 次、5~10 mL 0.5M NaOH 洗滌 3 次、5~10mL 純化水洗滌至中性，最后加入 10mL 保存液，將磁珠放置2~8℃環(huán)境保存。

(2) HABA 再生：用脫硫生wu素洗脫目標(biāo)蛋白的磁珠還可以用 HABA 緩沖液再生，加入 5~10mL1mMHABA 洗滌磁珠 5 次，接著用 BindingBuffer 洗滌磁珠至磁珠本身顏色，每次洗滌 5 min， 最后加入 10mL 保存液，將磁珠放置 2~8°C 環(huán)境保存。

蛋白純化流程的優(yōu)化

以上操作流程適用于大部分 Strep-TagII 標(biāo)簽蛋白的純化，根據(jù)目標(biāo)蛋白與 Strep-Tactin 蛋白純化磁珠的結(jié)合性能不同，用戶可以從以下幾個(gè)方面對(duì)純化流程進(jìn)行優(yōu)化，以提高目標(biāo)蛋白的回收率和純度。

提高目標(biāo)蛋白回收率的參考方法：

(1) 延長(zhǎng)蛋白溶液與磁珠孵育的時(shí)間；

(2) 添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標(biāo)蛋白降解；

(3) 增加磁珠用量；

(4) 延長(zhǎng)洗脫目標(biāo)蛋白的時(shí)間或增加洗脫次數(shù)；

提高目標(biāo)蛋白純度的參考方法：

(1) 在純化過(guò)程中添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標(biāo)蛋白降解；

(2) 延長(zhǎng)洗滌的時(shí)間，增加洗滌次數(shù)；

注意事項(xiàng)

(1) 首ci使用本產(chǎn)品前，請(qǐng)務(wù)必詳細(xì)閱讀本用戶手冊(cè)；

(2) 磁珠使用和保存過(guò)程中應(yīng)避免冷凍、干燥和高速離心等操作；

(3) 在使用本產(chǎn)品前，請(qǐng)務(wù)必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)；

(4) 請(qǐng)選用質(zhì)量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過(guò)程發(fā)生滲漏引起磁珠的損耗；

(5) 磁珠與溶液混合過(guò)程中，如果溶液粘稠無(wú)法通過(guò)翻轉(zhuǎn)離心管重懸磁珠，可采用移液器反復(fù)吹吸或短時(shí)漩渦混合使磁珠充分重懸；

(6) 用戶可根據(jù)實(shí)際需要保留經(jīng)磁性分離移去的上清液，進(jìn)行取樣檢測(cè)，以便分析純化過(guò)程和優(yōu)化蛋白純化流程；

(7) 本產(chǎn)品可以重復(fù)使用，重復(fù)使用時(shí)，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時(shí)，建議使用新的磁珠，以防交叉污染；

(8) 本產(chǎn)品需與磁性分離器配套使用；

(9) 本產(chǎn)品僅供研究使用。

Strep-tag II 蛋白純化磁珠-常備現(xiàn)貨 

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

M0128 Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin  5mL