NobleRyder M0238 NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

NHS磁珠Mag NHS-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：M0238

產(chǎn)品名稱：NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

英文名稱：NHS magnetic beads

產(chǎn)品規(guī)格：1ml/5ml

產(chǎn)品簡介：

說明：10mg/mL

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder M0238 NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

Mag NHS和 Magrose NHS都是表面為NHS基團(tuán)修飾，能夠與帶有伯胺基團(tuán)的蛋白和其他分子形成穩(wěn)定的肽鍵，用于親和純化抗體、抗原和其他生物分子。與傳統(tǒng)的羧基、an基磁珠相比，表面含NHS基團(tuán)的磁珠無需事先采用EDC/NHS 或戊二醛進(jìn)行活化，只需簡單地將含伯氨基的生物配體溶解在試劑盒自帶的Coupling Buffer 中，室溫下將蛋白與NHS磁珠混合1~2h便可將生物配體共價(jià)偶聯(lián)到磁珠上，具有操作簡單、偶聯(lián)條件溫和、生物配體偶聯(lián)快速高效等優(yōu)點(diǎn)。磁珠偶聯(lián)過程必需在不含任何氨基的緩沖溶劑中進(jìn)行。人工操作時，使用磁性分離架實(shí)現(xiàn)磁珠與溶劑分離。也可采用自動化設(shè)備操作，自動化操作適合用于多樣品的篩選。

蛋白偶聯(lián)操作流程及優(yōu)化點(diǎn)（僅供參考）

1.蛋白溶液的配制

2.磁珠的洗滌

3.蛋白偶聯(lián)：（優(yōu)化）

(1) Coupling Buffer 的種類。首先通過實(shí)驗(yàn)確定最合適的CouplingBuffer

 (2) 確定合適的 CouplingBuffer 后，再通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化蛋白溶液的濃度

4.封閉

5.磁珠保存

6.注意事項(xiàng)：

(1) 其中磁珠洗滌要嚴(yán)格按照說明書采用冷卻的 WashingBufferA快速洗滌 ，以防磁珠在洗滌過程中 NHS 基團(tuán)水解；

(2) 蛋白偶聯(lián)過程中，首先要通過實(shí)驗(yàn)確定合適的 CouplingBuffer（主要包括 CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50mM 硼酸溶液，pH8.5、100mM磷酸緩沖液，100mMNaCl，pH7.4 這四種）

(3) 確定合適的 CouplingBuffer 后，再以此 CouplingBuffer 為基礎(chǔ)，確定合適的偶聯(lián)蛋白濃度，因?yàn)榈鞍诐舛仍礁撸悸?lián)到磁珠上的蛋白的量會越大（這是由于 NHS 基團(tuán)跟蛋白偶聯(lián)和 NHS基團(tuán)本身水解是一對競爭反應(yīng)）。當(dāng)然此處要綜合考慮使用性能和成本，有些客戶偶聯(lián)少量的蛋白便可滿足使用需求，這時采用低濃度的蛋白便可，這樣可以降低成本。

(4) 封閉這一步可以采用試劑盒中自帶的 3M 乙醇胺，也可使用 Tris 緩沖液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl, pH 8.0），封閉時間不得低于 2h，如果化學(xué)封閉后背景仍然很高，還可以額外加一步 BSA 封閉。

蛋白偶聯(lián)操作步驟（僅供參考）

一、使用前準(zhǔn)備

以下操作過程以取磁珠樣品 500μL，采用 1.5mLEP 管為例介紹。用戶可根據(jù)自身需求按比例調(diào)整：

1. 蛋白溶液配制：

取適量待偶聯(lián)蛋白用 CouplingBuffer 溶解，配成濃度為0.1-3.0mg/mL 的蛋白溶液。已經(jīng)保存于 buffer 中的蛋白，需要通過透析或者脫鹽的方法徹di除去原有 buffer 里含伯胺基的物質(zhì)，然后

再用 CouplingBuffer 配成濃度為0.1-3.0 mg/mL 的蛋白溶液，將配制好的蛋白溶液于 4oC 保存?zhèn)溆谩?/span>

注： (1)為了達(dá)到更好的性能，蛋白濃度≥2.0mg/mL，這樣偶聯(lián)效率會更高，此處需綜合考慮成本和使用要求；

(2)蛋白溶液中不能含有帶伯氨基的成分，比如Tris，甘an酸，明膠，BSA 等；

2.磁珠清洗：

(1) 取 500μL 磁珠于 1.5mLEP 管中。

注：磁珠取樣前要反復(fù)顛倒、使用渦旋振蕩器使其混合均勻，以保證實(shí)驗(yàn)的同一性。

(2) 將 EP管置于磁性分離架內(nèi)，富集磁珠，去除上清液。

(3) 加 1mL2~8oC 預(yù)冷的WashingBufferA于1.5mLEP管中，渦旋15s，使磁珠混合均勻。

(4) 將 EP 管置于磁性分離架內(nèi)，富集磁珠，去除上清液。

2. 生物配體固定：

(1) 加 500μL 蛋白溶液于EP管中，渦旋30s，使其混合均勻。

注：磁珠洗滌后要立即加入蛋白溶液。

(2) 將 EP 管渦旋15s，置于垂直混合儀上，室溫混合1~2h。如果垂直混合不均勻，則反應(yīng)前30min，每隔5min取下EP管渦旋15s。此后，每隔15min，取下EP管渦旋15s。

注：如有需要可以4oC過夜反應(yīng)。

(3) 采用磁性分離架富集磁珠，保存流穿液

3. 磁珠封閉：

(1) 加 500μLBlocking Buffer 于 EP 管中，渦旋30s，將 EP 管置于磁性分離架內(nèi)，富集磁珠，棄上清液。

注：Blocking Buffer 除了試劑盒中提供的3M乙醇胺外，也可以使用100mMTris-HCl,150mMNaCl, pH 8.0 等其它封端試劑。

(2) 重復(fù)“步驟 （1）"四次。

(3) 加 500μLBlocking Buffer 于 EP 管中，渦旋 30s，將 EP 管置于垂直混合儀中室溫反應(yīng)2h。

(4) 將 EP 管置于磁性分離架內(nèi)，富集磁珠，棄上清液。

(5) 加 1mL 超純水于 EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。

4. 保存：

(1) 加 1mLStorage Buffer（需客戶自備，比如含0.05%疊dan化na或0.1%proclin-300的PBS 緩沖液，或者客戶根據(jù)自己實(shí)際需求選擇合適的保存溶液 ）于EP管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。重復(fù)該操作 2 次。

(2) 加入0.5mLStorage Buffer 于 EP 管中，充分混合，4oC保存?zhèn)溆谩?/span>

注：最終偶聯(lián)蛋白的磁珠濃度為10mg/mL.

注意事項(xiàng)：

1. 磁珠對水分敏感。為了保證產(chǎn)品質(zhì)量，在取樣之后需立即蓋上瓶蓋，并用封口膜密封，于 4℃保存。

2. 禁止將磁珠干燥或冷凍。干燥和冷凍操作可能導(dǎo)致磁珠的聚集從而喪失結(jié)合活性。

3. 使用280nm附近的波長來測定蛋白含量是不可取的，因?yàn)?NHS 基團(tuán)在280nm波長附近有很強(qiáng)的吸收，會嚴(yán)重干擾檢測結(jié)果。

4. 緩沖液中含有帶伯胺的物質(zhì)會抑制蛋白質(zhì)偶聯(lián)到磁珠表面，去除伯胺物質(zhì)可采用透析和脫鹽的方法。

5. 蛋白穩(wěn)定劑（如BSA，gelatin）會抑制抗體與磁珠的結(jié)合，因此在磁珠偶聯(lián)抗體過程中，需要確?？贵w保存體系中不存在含伯氨基的蛋白穩(wěn)定劑。

6. NHS 基團(tuán)易水解，故在用 WashingBufferA 洗滌時，一定要參照說明書進(jìn)行。

7. 蛋白溶液要預(yù)先配制好，WashingBufferA 洗滌完畢后，要立即加入蛋白溶液進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。

8.蛋白質(zhì)和磁珠的偶聯(lián)效率因蛋白質(zhì)種類和性質(zhì)差異而不同。一般而言，蛋白質(zhì)濃度為0.1-3.0 mg/mL 時利于蛋白質(zhì)偶聯(lián)；然而，對于不同的蛋白其濃度需要優(yōu)化。

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