NobleRyder C9958 TG1感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品貨號(hào)：C9958

產(chǎn)品名稱：TG1感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：10*100ul

TG1感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder C9958 TG1感受態(tài)細(xì)胞TG1 菌株來源于大腸桿菌K-12，生長速度快，主要用于噬菌體展示（PhageDisplay），也可進(jìn)行M13噬菌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，也可用于普通質(zhì)粒的克隆構(gòu)建及提取。lacZΔM15的存在可進(jìn)行α互補(bǔ)原理上的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。由于該菌株不含核酸酶endA1 突變，提取的質(zhì)粒中核酸酶含量較高，需用去蛋白液處理。TG1感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成，經(jīng) pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μgDNA。

基因型：supEthi-1 _(lac-proAB) _(mcrB-hsdSM)5(rK– mK–) [F′ traD36 proAB lacIqZ _M15]

菌株抗性: 對(duì)氨芐青mei素、卡na霉素、壯guan霉素、博lai霉素、慶da霉素、氯mei素和四huan素敏感。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

（以氨芐青mei素抗性的pUC19質(zhì)粒為例）

1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入1-5μL含有1-100ng的質(zhì)粒DNA 到細(xì)胞中，用手指

撥da管底，輕輕混勻。

2. 冰水浴中放置30分鐘，不要晃動(dòng)。

3. 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動(dòng)。

4. 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動(dòng)。

5. 加入500μL的室溫的 SOC或LB培養(yǎng)基。

6. 置于37℃搖床中，150-200rpm，復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有氨芐青mei素抗性的LB平板上。待液體吸干后，倒置平板 37℃培養(yǎng) 12-24 小時(shí)。

（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心30秒鐘，棄掉上清，留100μL左右的液體，用200μL吸頭輕輕吹打散菌塊， 取10μL重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個(gè)方法可以獲得更大的單克隆菌落。）

注意事項(xiàng)：

1．感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2．實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最di。

TG1感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建 

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C9958  TG1感受態(tài)細(xì)胞  10*100ul