NobleRyder C9258 T7表達感受態(tài)細胞

產(chǎn)品貨號：C9258

產(chǎn)品名稱：T7表達感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格：10*100ul/20*100ul

T7表達感受態(tài)細胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder C9258 T7表達感受態(tài)細胞為大腸桿菌BL21增強型菌株，為Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，主要適用于含有T7啟動子的原核表達載體（如pET等）的蛋白表達，同樣適用于需要大腸桿菌RNA聚合酶來轉(zhuǎn)錄RNA的非T7啟動子的表達載體（如pGEX等）。該菌株區(qū)別于BL21(DE3)菌株的優(yōu)勢在于T7RNA聚合酶基因整合在細菌染色體上的lac操縱子區(qū)域，基因組中無λ前噬菌體序列，并具有抗T1噬菌體感染等特點。T7表達感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率大于108cfu/μg。

基因型:fhuA2lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrCmrr)114::IS10

菌株抗性：對氨芐qing霉素，卡na霉素，壯guan霉素，氯霉su，鏈霉su和四環(huán)su敏感。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質(zhì)粒DNA或5-10μL連接產(chǎn)物到細胞中，用手指撥da管底，輕輕混勻；

2. 冰水浴中放置30分鐘，不要晃動；

3. 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動；

4. 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動；

5. 加入500μL無菌的SOC或LB培養(yǎng)基；

6. 置于37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。

（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心30秒鐘，棄掉上清，留100μL左右的液體，用200μL 吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μL重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟2的時間縮短到5分鐘，對于氨芐青霉su抗性的質(zhì)粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線于含氨芐青霉su抗性的LB平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需60分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng)。）

注意事項：

1．感受態(tài)細胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。

2．實驗過程中應(yīng)嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

T7表達感受態(tài)細胞 載體構(gòu)建 

產(chǎn)品訂購信息：

C9258 T7表達感受態(tài)細胞  10*100ul/20*100ul