石蠟包埋組zhi基因組提取試劑盒 質(zhì)粒提取

    NobleRyderD9598  石蠟包埋組zhi基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：D9598                                        

產(chǎn)品名稱(chēng)：石蠟包埋組zhi基因組提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：100T/50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，avoid light，1 year.

NobleRyderD9598  石蠟包埋組zhi基因組提取試劑盒本試劑盒采用特殊的脫蠟液和裂解條件釋提取石蠟包埋組織切片中的 DNA，克服了福爾馬林交聯(lián)造 成的抑制效應(yīng)。該試劑盒通過(guò)特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng)，將高品質(zhì)的 DNA 純化至小洗脫體積中。提取的基因組完整性好，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟：

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入休積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽（每瓶需要單獨(dú)加入45mL無(wú)水乙醇）。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

1、樣本處理  

a. 石蠟切片：取石蠟切片（5-10 μm厚，1×1 cm2 大小）5-8張。

b. 石蠟塊：手shu刀刮取約30 mg的組織樣本（盡量去除多余的石蠟）。 注意：如果樣品表面暴露于空氣中，最初刮取的2-3片棄掉不用。  

c.福爾馬林等固定液中的樣本：取30 mg樣本，用手shu刀切為數(shù)塊,置于1.5 ml離心管中,加入500μl PBS (0.01M，pH7.4)渦旋振蕩混勻,12,000 rpm室溫離心1 min, 棄上清，重復(fù)3次,然后從步驟7開(kāi)始操作。

2. 脫蠟（二選一）

a. 脫蠟液脫蠟

加入l mL脫蠟液，充分振蕩，65℃水浴30 min，再次充分振蕩，4℃下15000 rpm離心1 5 min，棄上清再加1 mL 脫蠟液，重復(fù)3遍。然后從步驟7開(kāi)始操作。

b. 二甲苯脫蠟

將石蠟切片或石蠟塊樣本裝于1.5 ml無(wú)菌離心管中，加入1 ml二甲苯，劇烈渦旋10 -15s。然后從步驟3開(kāi)始操作（二甲苯需要客戶(hù)自備）。

3、12000 rpm 室溫離心2 min，棄上清。注意：不要倒掉沉淀。

4、 在上述管中加入1 ml無(wú)水乙醇，渦旋混勻10s。  

5、12,000 rpm(~13,400×g )室溫離心 2 min，棄上清。注意：不要倒掉沉淀。  

6、室溫放置5-10 min，充分揮發(fā)乙醇。

7、向沉淀中加入200 μl緩沖液A和20μl蛋白酶K、2μl RNase A，充分混勻，56℃水浴消化1h-3h直至樣本wan全裂解。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化wan全為止。消化wan全的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠。

8、加入200ul 體積溶液B，充分顛倒混勻，如出現(xiàn)白色沉淀，可放置于75℃ 15-30min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不che底，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致堵塞吸附柱。

9、加入200ul無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中。

10、12000rpm 離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

11、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

12、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

13、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，如酶切、PCR等。

14、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心2min。

15、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

注意事項(xiàng):

1、試劑盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

3、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。

4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率：洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。

5、本產(chǎn)品所提DNA的完整性依賴(lài)于樣本類(lèi)型、儲(chǔ)存時(shí)間以及固定條件。如果甲醛固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（超過(guò)24h）或樣本存放時(shí)間過(guò)久（＞1年）則易導(dǎo)致DNA完整性受損，無(wú)法擴(kuò)出長(zhǎng)片段。

石蠟包埋組zhi基因組提取試劑盒 質(zhì)粒提取

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